hCMEC/D3细胞 人永生化人脑微血管内皮细胞

细胞：hCMEC/D3细胞

中文名称：人永生化人脑微血管内皮细胞  

生长特性：贴壁细胞

培养基：DMEM-H +10%FBS（GIBCO胎牛血清）

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

细胞常规培养传代流程（ 请严格遵照无菌操作）

1． 吸出原培养瓶中的培养基，PBS 缓冲液润洗细胞两次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在 1-2min）

2． 镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰_酶，加 6~8ml 培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散。

3． 取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4． 注意培养基 PH 值变化情况，定期换液（每周 2-3 次），待细胞密度达到 80%以后重复 1 项操作或冻存。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

分离出具生殖潜能干细胞

在母体中发育了50天的猪胎儿皮肤组织中分离出一些干细胞，这些干细胞具有某种分化成具有卵母细胞特性的细胞的内在机制。

用诱导分化的条件培养基培养这些干细胞时，发现其中的一个亚群可以表达一些只有sheng殖细胞才能特异表达的基因和蛋白。

根据形态学观察，发现所培养的细胞从诱导分化的第10天开始，形成了克隆样结构，其中的一些克隆样结构逐渐从培养皿上脱壁，呈“囊泡状聚集体”悬浮于培养基中。在很多囊泡状聚集体中央有一个较大的细胞，这与同sheng殖有关的卵母细胞复合体结构非常相似。

如果将这些囊泡状聚集体放入供卵母细胞生长的培养基中，经过长时间的培养，囊泡状聚集体中的细胞亚群可以将位于中央部分的大细胞挤出；进一步培养这些“大细胞”，最终可以长成直径为80-100?滋m的细胞。 

为了检测这些大细胞是否表达了具有卵母细胞代表性的标记分子，将这些大细胞挑出，分组提取RNA。

RT-PCR的检测结果表明，在这些“大细胞”以及作为阳性对照的卵巢组织中，均可以检测到所有卵母细胞特异表达的标记分子物。