H1573细胞培养（人肺腺癌细胞）

细胞：H1573细胞

中文名称：人肺腺癌细胞

生长特性：贴壁

培养基：DMEM-H培养基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

H1573细胞传代：

1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。

2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时；

（可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。

3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

非洲猪瘟病毒(ASFV)核酸检测

实验标本采集：

猪肺、脾、肾、肠系膜及额下淋巴结等组织：采集可疑病死猪或捕杀病猪疑似组织约1g左右，置入1.5ml洁净EP管，立即送检。

血清：

 用一次性无菌注射器抽取受检猪耳静脉或者前腔静脉静脉血2-5ml，静置斜放待血清析出， 1,0000rpm离心3分钟，可取上清立即用于测试；

或吸取上部血清(约500µl)转入无菌1.5ml Eppendoff管，立即送检。

细胞保存和运输：上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃。但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。

样品处理：    

血清或病毒液：取液体标本约50μl，转至1.5ml洁净离心管中，加50μl核酸提取液B充分混匀(提取液用前需室温溶解并充分混匀)后100℃10分钟，13,000rpm离心3分钟，取上清液3μl进行PCR扩增。

肺、脾、肾、肠系膜及额下淋巴结等固体组织：

取约200mg固体组织，用生理盐水洗净表面残余血液，转至研磨器中，加1ml生理盐水，研磨成组织匀浆，取50μl组织匀浆液转至1.5ml洁净的离心管中，加50μl核酸提取液B（内含不溶物质，用前需室温溶解并充分混匀），充分混匀，100℃裂解10min，4℃13,000g离心3min，取上清液3μl进行PCR扩增。