H1437细胞培养（人肺腺癌细胞）

细胞：H1437细胞

中文名称：人肺腺癌细胞

生长特性：贴壁

培养基：1640培养基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

H1437细胞传代：

1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。

2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时；

（可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。

3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

非洲猪瘟病毒(ASFV)核酸检测(PCR-荧光探针法)

实验目的：适用于检测猪血清、肺、脾、肾、肠系膜及额下淋巴结等组织标本或病毒培养液中非洲猪瘟病毒(ASFV)DNA，适用于猪瘟病毒感染的辅助诊断及流行病学调查。其检测结果仅供参考。

实验原理：用一对非洲猪瘟病毒(ASFV)特异性引物和一条特异性荧光探针，应用碱裂解法裂解提取DNA，后者在Taq酶作用下，配以FQ-Buffer(内含Mg2+、Tris-HCl等)、四种核苷酸单体（dNTPs）等成分；

通过PCR-荧光探针法对非洲猪瘟病毒(ASFV)DNA进行扩增，从而达到实时快速定量检测之目的。

实验试剂：

（核酸提取液B 4管 500μl/管）（Taq酶系1管 80μl/管）（ASFV –PCR MIX1管 960μl/管）

（ASFV阳性质控品1管 50μl/管(1×10P7PCopies/ml)）（阴性质控品 1管 500μl/管）

实验标本类型：猪血清、肺、脾、肾、肠系膜及额下淋巴结等组织标本或病毒培养液等。