明胶酶谱法检测试剂盒的图例

检测原理：

本试剂盒采用凝胶反相酶谱法(Zymography)检测MMP-2、MMP-9 活性及其无活性前体酶原谱系。Zymography 是一种广为使用的、基于SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法，其灵敏度可达1 nM，高于ELISA方法，其基本原理和程序是：制备含有胶原酶底物的SDS-PAGE凝胶，含蛋白酶的样

品在此凝胶中进行电泳，电泳时SDS与样本中的MMP可逆性结合，导致MMP氢键和疏水键破坏而不能发挥分解明胶的作用。电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer孵育，MMP恢复活性，凝胶中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶条带的位置，蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白，因而不被染色

而形成透亮区域，从而能同时指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。本试剂盒提供MMP-2、MMP-9特异蛋白底物及酶学反应缓冲液，可检测少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶谱及活性，检测灵敏度~1nM。试剂盒可进行25-50次标准小胶检测（如果样本MMP含量高，孵育时间短，不用换液可多50次），如果小胶加样孔为10~15个，则总计可多检测500~750个样品。

MMP透明条带的大小、位置和酶谱的图例。注意因为样品未还原和加热变性，条带位置并不对应推算的蛋白分子量。下图1，正常血浆样品阳性对照可能出现的反相显示的透明条带位置：66kDa(MMP-2)，72kDa(proMMP-2)，87kDa(MMP-9)，92kDa(proMMP-9)，注意血浆中只有很少量的激活状态的66kDa的MMP2，增加上样量在ProMMP2下面隐约可见(右侧泳道)。如下图2，不同于正常血浆MMP酶谱，每种组织样品(如牙周膜韧带组织)都具有自己特定的MMP活性酶谱，部分proMMP9(92kDa)可能会结合一个25kDa微球蛋白形成MMP9复合物，条带位置约125-130kDa，其二聚体条带大约在215-225kDa位置(图中并未显现)，多聚体条带位置240kDa，严格说他们都是MMP9复合体，但也有人称其为proMMP-9。注意在这种组织中activeMMP9活性低，但

activeMMP2活性高，与血浆MMP活性酶谱形成了鲜明的对比

条带扫描：将凝胶放在扫描仪上扫描。虽然MMP条带透明，但凝胶背景并非真正全黑。解决办法：可用非透射光扫描，或用软件图像处理程序调整背景显示为灰度显示，并尽量设置为黑色。MMP 条带则为白色，这种背景黑条带白的格式是英文论文中常见的格式。