细胞周期检测实验步骤

细胞周期检测实验是一种通过流式细胞术来分析细胞在细胞周期各阶段分布的实验方法。这个实验对于理解细胞的生长、分化和疾病状态至关重要。

细胞周期检测实验步骤：

1. 收集细胞：A: 收集细胞5~20×105于离心管中，若细胞比较小(如淋巴细胞)400 g离心，若细胞比较大(如肿瘤细胞)300 g离心，5~10 min，弃去培养液;

2. 洗涤：加入1 ml冷PBS(提前放4℃预冷)洗涤1次，离心弃去上清;

3. 固定前处理：利用管底残留的液体，轻弹管底，将沉淀重悬成细胞悬液，避免细胞成团;

4. 细胞固定：加入约1 ml -20℃预冷的无水乙醇中，轻轻吹打混匀，-20℃固定1 h或过夜;

5. 洗涤：加入1 ml冷PBS(提前放4℃预冷)洗涤1次，300 g离心10min，弃去上清;

6. RNA酶消化：300 g 离心 5 min，吸尽上清后，加入 100 μL 的 RNase A 并充分悬浮细胞，37°C 水浴 30 min。

7. PI染色：加入400μL的PI溶液并充分混匀，4℃避光孵育30 min;

8. 上机检测：用流式细胞仪在激发波长488nm波长处检测红色荧光，低速获取细胞，采用分析软件进行DNA含量分析。