沉淀型单组分TMB底物溶液使用说明
产品简介:
TMB（四甲基联苯胺；3，3’，5，5’-Tetramethylbenzidine）是检测
辣根过氧化物酶（HRP）的灵敏显色底物之一。 我公司研究开发的沉淀型单组份
TMB显色底物液，适用于检测膜上蛋白质的免疫学实验结果显示。本产品主要由
TMB和优化的反应缓冲液组成。免疫反应固定的HRP可催化本产品形成不溶性的
蓝色络合物，并沉淀结合在膜上，显示目的蛋白的位置及表达量。
适用范围:
Western Blot
其它通过沉淀反应检测HRP的应用
主要成分：
产品使用说明:
本说明书是沉淀型单组分TMB底物溶液的一般使用说明，每个系统根据经验来优化。
注意：
1、显色时间过长可能导致底物沉淀从膜上脱落或背景加深。
2、颜色变化的快慢很大程度上取决于蛋白量、抗体使用量以及所使用的封闭液种类等。
1. TMB
2. H2O2及特殊的稳定剂
3. 导致TMB反应产物沉淀的特制化合物
自备溶液
PBS-T：PBS中含0.05%的Tween-20。
Western Blot膜封闭液
以合适的稀释比率稀释在封闭液中的一抗。每个系统一抗的佳稀释比率根据经验来决定。
以合适的稀释比率稀释在封闭液中的HRP标记的二抗。每个系统二抗的佳稀释比率根
据经验来决定。
操作步骤
1. 将膜从转膜系统中取出后在封闭液中室温摇动封闭30~60分钟。
2. 加一抗室温摇动孵育1~2小时。
3. 用PBS-T洗膜三次，再用PBS洗涤一次。
4. 加HRP标记的二抗室温摇动孵育1小时。
5. 用PBS-T洗膜三次，再用PBS洗涤一次。
6. 将膜浸入沉淀型单组分TMB底物溶液中，反应2－30分钟（根据颜色变化
掌握染色时间）。
7. 显色完成后，用蒸馏水冲洗可终止显色反应。
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