高效液相色谱法测定铁皮石斛中的甘露糖

【铁皮石斛】
铁皮石斛为兰科植物铁皮石斛 Dendrobiumoffi---cinale Kimuraet Migo 的干燥茎，具有益胃生津，滋阴清热之功效，因其特殊的生存环境和的滋补功效名列“中华九大仙草”。由于石斛药材在化学成分和结构组织上具有一定相似性，使鉴定和质量评价工作较困难。目前常用的方法之一是高效液相色谱法，《中国药典》2015 部规定：供试品色谱中，甘露糖与葡萄糖的峰面积比应为（2.4~8.0）；所采用高效液相色谱的理论塔板数按甘露糖峰计算应不低于4000；按干燥品计算，含甘露糖（CHO）应为(13.0~38.0)%。
【样品制备】
（校正因子计算） 取适量，配置成 1ml 含 12mg 的溶液，作为内标溶液。另取甘露糖对照品置于容量瓶中，加入内标溶液,加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取 400μl，加 入 PMP（1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮）甲醇溶液与*溶液各 400μl，混匀，加热水 浴反应。再加盐酸溶液混匀，用洗涤，弃去液，水层离心后，取上清液 10μl,注入测定，计算校正因子。
（铁皮石斛样品制备）取本品粉末 0.1219g,置提取器中，乙醇加热回流提取，弃去乙醇液，药淹挥干乙 醇，滤纸筒拆开置于烧杯中，加水再加入内标溶液，搅拌下煎煮小时，室温加水、混匀，离 心，吸取上清液适量置顶空瓶中，加盐酸溶液、封口，混匀、水解、放冷，用*溶液 调节 pH 值至中性，取上清液注入液相色谱仪，测定，即得。

【色谱条件】

液相色谱：sanotac LC1200高效液相色谱，色谱柱：kromasil C18柱

缓冲液：0.02mol/L 乙酸铵溶液
流动相：乙腈：缓冲液=20：80
流速：1.0ml/min；
进样量 20μL；
柱温：室温；
检测波长：250nm

【结果分析】

对谱图进行积分，输入内标物含量及甘露糖含量，由sanotac操作软件直接获取校正因子见下表:

组分名	保留时间	峰面积	峰高	浓度 （mg/ml）	校正因子
甘露糖对照品	14.34	932946	48310	0.098	0.5944
PMP	15.84	257741	5741
内标物	19.14	1118490	41883	0.12

对谱图进行积分，输入内标物含量及甘露糖含量，由色谱软件直接获取甘露糖浓度见下表:

组分名	保留时间	峰面积	峰高	理论塔板数	浓度 （mg/ml）
甘露糖	14.36	2098964	107425	13378	0.2268
PMP	15.92	162863	3545
内标物	19.14	1087723	37885	0.12
葡萄糖	28.34	434464	12686

 
经计算该铁皮石斛样品中甘露糖的含量为 18.61%，结果符合《中国药典》2015 部“按干燥品计算，含甘露糖（CHO）应为（13.0~38.0）%”的要求。