酶联生物教您如何使用ELISA试剂盒

酶联生物免疫学检验的各领域中的ELISA试剂盒，有着灵敏度高、特异性强、经济性较好等优点，酶联生物的ELISA试剂盒在所有产品中销量是高的，本公司ELISA试剂盒仅用于科研，不用于临床。在实验过程中肯定会有很多科研朋友是不懂的，今天就给大家介绍一下ELISA试剂盒的使用方法。

一：实验操作程序简述

1. 准备试剂，样品和标准品；

2. 加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟；

3. 洗板5次，加入显色液A、B，37℃反应10分钟；

4. 加入终止液；

5. 15分钟之内度OD值；

二：包被的条件

包被用抗原或抗体的浓度，包被的温度和时间，包被液的pH等应根据试验的特点和材料的性质而选定。ELISA试剂盒抗体和蛋白质抗原一般采用pH9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液，也有用pH7.2的磷酸盐缓冲液及pH7~8的Tris-HCL缓冲液作为稀释液的。

通常在ELISA板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置放置一个晚上，37℃中保温2小时被认为具有同等的包被效果。包被的适当浓度随载体和包被物的性质可有很大的变化，每批材料需通过实验与酶结合物的浓度协调选定。一般蛋白质的包被浓度为100ng/ml-20ug/ml。

三：竞争法测抗原

小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少，zui后的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。

四：抗原和抗体

制备结合物时所用抗体一般 均为纯度较高的IgG，以免在与酶联结时其他杂蛋白的干扰。用亲和层析纯的抗体，这样全部酶结合物均具有特异的免疫活性，可以在高稀释度进行反应，实验结果本底浅淡。如用F(ab')2进行标记，则更可避免标本中RF的干扰。

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