细菌培养的基础是配制培养基牛肉膏蛋白胨培养基的配方然后再加热溶解，补足水分，其制作过程包括以下4个环节：①清洁玻璃器皿 一般用肥皂液煮沸30 min,或用重铬酸钾和浓硫酸配制的溶液浸泡数10 min，然后用清水冲洗，晾干后保存备用。②配制液体培养基 a．根据需要配制培养基数量，先在烧杯中注入少量蒸馏水；b．按培养基配方称量各种成分的原料，依次使之溶解；c．补足需水量；d．如用牛肉膏、蛋白胨配制时，需加热熔化后溶解；e．加热后，补足水分即可。③配制固体培养基 在液体培养基里加入一定量的琼脂，加热熔化即可。④调pH 先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基滴加1 mol/L 的NaOH溶液，边加边搅拌，并随时用pH试纸测pH,直到7.4～7.6为止。反之则用1 mol/L的HCl进行调节。⑤过滤分装 用纱布趁热过滤，将滤液分装于试管中，其量约为试管体积的1/5（不要玷污管壁）。⑥加棉塞 培养基分装完毕以后，在管口上加一个棉塞。棉塞能防止杂菌污染；保证通气良好，加棉塞时，应使棉塞长度的2/3在试管口内。⑦包扎 每10支试管用线绳捆成一捆，并且在管口外面包上一层牛皮纸，然后用线绳扎好。在每捆试管外挂上标签，注明培养基名称、配制日期和制作者姓名。
（2）灭菌 高压蒸汽灭菌的效果是细菌培养的关键。具体操作如下：①打开高压灭菌锅，取出里面的灭菌桶，向锅内加水（最好用开水）水面与底架平齐为宜。②将扎好的试管管口向上，竖放在灭菌桶内，再将灭菌桶放回灭菌锅。
注意：灭菌桶内的物品不能放得太挤，否则会影响灭菌效果。
③加盖，并将排气软管插入灭菌桶的排气槽内。以两两对称的方式，同时旋紧相对的两个紧固螺栓，以防漏气。④排出锅内的冷空气。⑤当锅内的压力上升到规定压力时，维持压力20 min，切断电源。⑥压力降至0以后，打开排气阀，排气完毕打开灭菌锅。
（3）搁置斜面 如果要制作斜面培养基，将灭菌后的培养基冷却到50℃，每个试管带棉塞的一端搁在一根木棒上，使培养基形成斜面，斜面的长度不超过试管总长度的一半。
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