HCV-29细胞培养（人膀胱上皮细胞）

细胞：HCV-29细胞

中文名称：人膀胱上皮细胞

生长特性：贴壁

培养基：1640 培养基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

收到细胞后请尽快更换配套培养基，或自己配置的新鲜培养基（含15%血清），如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时）。

HCV-29细胞传代：

1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。

2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时；

（可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。

3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

牛流行热病毒(BEFV)核酸检测 标本采集、保存和运输

适用标本类型：发病动物血液、呼吸道分泌物试子及组织脏器(肺脏及淋巴结等) 或病毒培养液。

标本采集：

1）血清：用一次性注射器取静脉血2-3ml，转至5ml的干燥管中，密闭送检。

2）呼吸道分泌物试子：用棉试子取咽或泄殖腔分泌物，置入1ml含有1.0ml PBS(或生理盐水)的离心管中，立即送检。

3）组织脏器：取发病动物肺脏及淋巴结等组织约1g，置一1.5ml的洁净离心管中，密闭送检。

3. 保存和运输：上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃。但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。

适用仪器：主要包括ABI GeneAmp PCR System7700、ABI GeneAmp PCR System7500、ABI PRISM 7300、LightCycler等毛细管的仪器，MJ Opticon系列或取得资格认证的定量PCR仪。

质控标准：

阴性质控品：没有荧光值增长，全部阴性。

BEFV-阳性质控品：阳性质控品的 Ct 值均应小于30.0。

以上条件应同时满足 ，否则，此次试验视为无效，全部试验应重新进行。