GC-2 spd细胞培养（小鼠精母细胞系）

细胞：GC-2 spd细胞

中文名称：小鼠精母细胞系

生长特性：贴壁

培养基：1640培养基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

GC-2 spd细胞传代：

1）：细胞密度约80%时，吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2~3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意根据实际情况，把握消化时间）。

2）：镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时；

（可用吸管吸起些许yi酶轻轻吹打细胞层某处，即可肉眼可见细胞层脱落，或吹打后镜下观察吹打处，即消化完成，否则继续消化）

直接吸掉yi酶，加3~4ml 培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。

3）：取部分细胞悬液转移到新的培养皿中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4）：注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

胸膜肺炎放线杆菌(APP)核酸扩增检测：

实验仪器：主要包括ABI GeneAmp PCR System7700、ABI GeneAmp PCR System7500、ABI PRISM 7300、LightCycler等毛细管的仪器，MJ Opticon系列或取得资格认证的定量PCR仪。

实验方法：

DNA提取 样品处理

肺脏、淋巴结等固体组织：

取100mg左右组织标本，加入1ml生理盐水，用研磨器充分研磨，取50μl左右组织匀浆转移到1.5mL的EP管中，加入50μl核酸提取液B(提取液内含不溶物质，使用前室温解冻并充分混匀)，充分混匀。100℃处理10分钟，13,000rpm离心3分钟，取上清液4μl做PCR反应。

痰液、培养物、体液等液体标本：

充分混匀标本，取50μl液体标本，加入加50μl核酸提取液B(提取液内含不溶物质，使用前室温解冻并充分混匀)，充分混匀。100℃处理10分钟，13,000rpm离心3分钟，取上清液4μl做PCR反应。

阴性质控品：取50 μl阴性质控品加入50μl核酸提取液B，充分震荡。后100℃裂解10分钟，然后13,000rpm离心3分钟，取上清液4μl做PCR反应。

APP-阳性质控品：直接取4μl进行PCR扩增。或按照PCR扩增介绍方法进行定量分析。