转氢酶1（比色法）测试盒TH-1活性计算

一、TH-1活性计算

1、用微量石英比色皿测定的计算公式如下：

（1） 按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol APADPH定义为一个酶活性单位。

 TH-1活性（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr)÷T=149×ΔA÷Cpr

（2） 按样本鲜重计算

单位的定义：每g组织每分钟产生1 nmol APADPH定义为一个酶活性单位。

TH-1活性（nmol/min /g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=74.5×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算

单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟产生1 nmol APADPH定义为一个酶活性单位。

TH-1活性（nmol/min /104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.149×ΔA

V反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：APADPH摩尔消光系数，6.7×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.02 mL；V样总：加入提取液体积，0.5mL；T：反应时间，10 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。

2、用96孔板测定的计算公式如下：

（1） 按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟产生1 nmol APADPH定义为一个酶活性单位。

 TH-1活性（nmol/min /mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr)÷T=298×ΔA÷Cpr

（2） 按样本鲜重计算

单位的定义：每g组织每分钟产生1 nmol APADPH定义为一个酶活性单位。

TH-1活性（nmol/min /g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=149×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算

单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟产生1 nmol APADPH定义为一个酶活性单位。

TH-1活性（nmol/min /104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.298×ΔA

V反总：反应体系总体积，2×10-4 L；ε：APADPH摩尔消光系数，6.7×103 L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.02 mL；V样总：加入提取液体积，0.5mL；T：反应时间，10 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。