龙胆含量测定方法是以龙胆苦苷为指标

　　龙胆为龙胆科植物条叶龙胆版《中国药典》收载的含量测定方法是以龙胆苦苷为指标，采用高效液相色谱法。文献报道的龙胆及其制剂的含量测定方法主要有高效液相色谱法和薄层扫描法。

　　⑴高效液相色谱法2005版《中国药典》龙胆含量测定项下：色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(3：7)为流动相，检测波长为270nm。理论板数按龙胆苦苷峰计算应不低于3000。内标溶液的制备：精密称取适量，2甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品粗粉约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇10ml，放置12小时，时时振摇，精密量取上清夜2ml，置10ml量瓶中，精密加内标溶液2ml，加甲醇至刻度，即得。2000年版《中国药典》规定龙胆苦昔含量的测定检测波长为254nm。流动相为甲醇-水(25：75)。

　　文献报道的HPLC方法，采用的色谱条件及样品处理方法大都为药典规定的，现举一例。林政义等采用HPLC法研究不同时节采收的三花龙胆中龙胆苦苷的含量。仪器：Waters高效液相色谱仪(美国)；SPD-10A 紫外检测器；色谱柱Hypersil C18柱(4.6mm×200mm)。流动相：甲醇-水(60：40)；柱温：室温；流速：0.7mL/min；检测波长：274nm。通过不同溶剂对龙胆中龙胆苦苷提取，以甲醇为最好，其次为70%乙醇，故选用甲醇为提取溶剂，但由于甲醇有毒，在大规模生产时，70%乙醇亦可作为良好的选择溶剂。

　　⑵薄层扫描法用薄层扫描法测定龙胆苦甙的含量，文献报道地较少，一般用双波长扫描法。饶高雄等用薄层色谱扫描法测定滇产龙胆生药及制剂中龙胆苦甙的含量。采用CS-9000双波长薄层色谱扫描仪，以氯仿-甲醇-水(10：4：1，下层)系统为展开剂，龙胆苦甙Rf值约0.5，择测定波长λS=285nm，参比波长λR=310nm，狭缝0.4nm×0.4nm，SX=3。回归方程：Y=28745.6X-14268.1，r=0.9997，龙胆苦甙点样量1～16μg范围内线性关系良好。采用薄层色谱扫描测定龙胆生药和中龙胆苦甙的含量，提取简便，分离快速，测定准确，重现性好，适用于质量标准和生产工艺的控制。

　　董丽等测定中龙胆苦甙的含量时，以醋酸乙酯-甲醇-水(20：2：1)为展开剂，λS=270nm，λR=350nm，样品用甲醇提取后l，经中性氧化铝柱(氧化铝120目，1.5g，内径15mm)，以甲醇洗脱至无色。

　　⑶高效毛细管电泳法现阶段也有采用高效毛细管电泳法测定龙胆苦苷的含量。曹雅男等采用毛细管区带电泳(CZE)法测定生药龙胆中有效成分龙胆苦苷的含量。仪器：PA/CES000型毛细管电泳仪，紫外检测器，System Gold软件，熔融石英毛细管柱(57cm×75μm，有效长度50cm)(Beckman美国)。以为内标物，样品用甲醇超声处理。运行电解质为含10%甲醇的20mmol/L硼砂缓冲液(pH10.6)；工作电压18kV；柱温25℃ ；检测波长280nm。结果：测得龙胆苦苷的回归方程为y=0.0787+1.9981X(r=O.9998)；平均回收率为101%；RSD=2.64%(n=5)。结果本方法简便，准确，快速，重复性好。可用于龙胆中龙胆苦苷的测定。

　　理化鉴别1. 取该品粉末约2g，加甲醇10ml，冷浸过夜，滤过，滤液浓缩成约4ml，分成两份，一份作薄层用.另一份加稀酸稀释后，滴加碘化铋钾试液，有橘红色沉淀产生.(检查生物碱)

　　2. 薄层层析：取上述甲醇提取液，另取龙胆苦贰甲醇溶液为对照品溶液，分别点样在同一硅酸GF254薄层板上，用氯仿—甲醇—水(30:10:1)展开12cm，取出晾干，置紫外灯(254nm)下检视，样品溶液色谱在与对照品溶液色谱相应的位置，显相同的紫红色斑点.

　　3. 紫外光谱：将龙胆、条叶龙胆、坚龙胆的甲醇浸出液，成带状点于硅胶GF板，以氯仿-甲醇-水(30:10:1)展开12cm，将在紫外灯下Rt值为0.4处的紫红色带刮入带塞试管中，加甲醇5ml，密塞，于60℃水浴上加热1小时，不时振摇，离心，取上清液，分别测定紫外光谱，在270nm处均有最大吸收峰.