H1688细胞培养（H1688细胞简介）

细胞：H1688细胞

中文名称：人小细胞肺癌细胞

生长特性：贴壁细胞

来源：ATCC细胞库

培养基：1640培养基  血清：10%FBS（GIBCO胎牛血清）

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；） 

细胞常规培养传代流程（ 请严格遵照无菌操作）

1． 吸出原培养瓶中的培养基，PBS 缓冲液润洗细胞两次，加 2-3 ml 0.25% yi酶进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在 1-2min）

2． 镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉yi酶，加 6~8ml 培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散。

3． 取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4． 注意培养基 PH 值变化情况，定期换液（每周 2-3 次），待细胞密度达到 80%以后重复 1 项操作或者冻存。

（ADV）核酸扩增检测：

计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10,000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入26μl，向每管中加入处理后样品(所获得的cDNA样品)或ADV–阳性质控品(使用前用阴性质控品梯度稀释10倍、100倍、1000倍，记为1×10P6PCopies/ml，1×10P5PCopies/ml，1×10P4PCopies/ml)和阴性质控品4μl，10,000rpm瞬时离心30秒。将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内，按对应顺序设置阴性控品，阳性定量标准品以及未知标本，并设置反应体积(30μl)、样品名称、标记荧光基团种类(报告基团为FAM，淬灭基团为TAMRA)和循环条件：

ABI PRISM 7700，ABI PRISM5700，ABI GeneAmp 7000 (需要剪掉反应盖)，ABI PRISM7300/7500(使用8联管)，MJ Opticon(使用8联管)等使用薄壁管的仪器，循环条件：94℃→2分钟，后93℃ 30秒→55℃ 45秒， 40个循环。

LightCycler等使用毛细管的仪器，循环条件：94℃→2分钟，后93℃ 5秒→56℃ 45秒，共40个循环。

结果分析判定:

反应结束后保存检测数据文件。根据分析后图像调节baseline的start值（3-8），stop值（13-18）以及Threshold值，使Std curve 窗口下的标准曲线达到最佳（correlation数值介于-0.97~-1之间，correlation数值等同于∣r∣值），最后到Reporter窗口下记录仪器自动分析计算出的未知标本数值（Qty-Copies/ml）。