ADV核酸检测实验

ADV核酸检测实验

实验目的：检测动物血清或血浆、肝、脾、淋巴结组织等样本中(ADV)DNA，其检测结果仅供临床参考。

实验原理：选取一对(ADV)特异性引物和一条特异性荧光探针，应用碱裂解法提取DNA，后者在耐热DNA聚合酶(Taq酶)作用下，配以FQ-Buffer(内含MgP2+P、Tris-HCl等)、四种核苷酸单体(dNTPs)等成分，通过PCR-荧光探针体外扩增法对(ADV)进行扩增，从而达到快速实时定量检测之目的。

适用标本类型：疑似动物血清或血浆、肝、脾、淋巴结组织和咽拭子等样本。

标本采集：

血清：用无菌注射器抽取受检动物静脉血2毫升，注入无菌5ml干燥管(或含促凝剂)，立即轻轻颠倒管子混合5至10次，密闭送检。

肝、脾、淋巴结等组织：取可疑部位组织1g，转至一洁净的1.5ml的离心管中，密闭送检。

保存和运输：标本可立即用于测试， 2-8℃保存下不应超过24小时； -70℃以下长期保存。避免反复冻融。标本运送时应采用0℃冰壶。

1.（标本预处理）血清、血浆等液体标本：吸取液体标本100ul至新的洁净的1.5ml离心管，加入100ul核酸提取液A，13,000rpm离心3min，去上清保留约50ul沉淀。

2.（标本预处理）肝、脾、淋巴结等组织：用适量灭菌生理盐水清洗送检的组织的血液；取大约100mg的组织，加入1ml的灭菌生理盐水用匀浆研磨成组织浆，移至新的1.5ml离心管，13,000rpm离心5min，去上清留沉淀；

DNA提取：向上述标本中加入50μl核酸提取液B充分混匀，100℃烈解10min。13,000rpm 离心3min，备用。

阴性质控品：取50ul阴性质控品，加50ul核酸提取液B充分混匀(提取液用前需室温溶解并充分混匀)后100℃10分钟，13,000rpm离心3分钟，取上清液4ul做PCR反应。

ADV阳性质控品：直接取4ul进行PCR扩增，或按照PCR扩增介绍方法进行定量分析。