家蚕卵黄蛋白ELISA试剂盒操作步骤

家蚕卵黄蛋白ELISA试剂盒操作步骤:

1、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

2、温育:用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

3、配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

4、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此

重复5次,拍干。

5、加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。

6、显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

10 分钟.

7、终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

8、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。