技术网

您现在所在位置:技术网晶抗生物流式细胞检测样本如何保存方法如下

晶抗生物流式细胞检测样本如何保存方法如下

2025/11/6 11:41:03

全血样本:一般来说,血液样本必须在6个小时内处理,晚不得超过12小时;做完染色后,需要放在多聚甲醛中保存,一般可以存放3天左右。

培养细胞样本:培养的细胞可以用多聚甲醛保存。做DNA倍体的样本:将样本保存在70%的乙醇中,并适量加入血清,-70℃冰箱保存,可以几个月内检测。


抗体染色的流式细胞不能立即检测该如何处理?

如果实验对细胞活性要求比较高,如凋亡实验,必须尽快检测;如果实验对细胞活性要求不高,可以使用含有4%多聚甲醛的PBS固定样本30分钟,固定后的细胞4℃过夜保存,次日检测。


同型对照的作用是什么?

抗体有时会和非抗原结合,可能会因为非特异的蛋白-蛋白相互作用结合细胞内成分,因为疏水作用结合脂肪,也可能会结合一些细胞表面表达的抗体受体。比如,IgG亚型的抗体会结合细胞表面的Fc受体,如CD16、CD32和CD64。理想条件下,各种类型的非特异性结合都可以通过蛋白(BSA、牛奶或动物血清)来阻断。Fc受体的结合则可以通过与含免疫球蛋白的血清预孵育来阻断。一个抗体非特异性相互作用和受体结合的情况,可以用无关抗原的相同亚型抗体来比照。


什么时候需要使用同型对照?

做胞内流式实验:比如流式细胞胞内细胞因子、趋化因子和信号蛋白等。

表面标志特异性不高或者不常见的: 一些特异性不高的抗体,如多抗,非特异性结合非常多,使用同型对照可排除假阳性; 因为不熟悉不常见标志的表达情况,根据同型对照可以判断阳性细胞的位置,对流式非常熟悉,且检测的是CD3、CD4、CD19等表达强度非常高的标志,可以不使用同型对照。


怎样选择同型对照?

一般选择与一抗的成分相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体比如抗人的CD56 FITC标记的抗体,亚型是Mouse IgG1,κ,那么它的同型对照应该是FITC标记的Mouse IgG1,κ,如果是抗体的组合形式,纯化的一抗+荧光标记的二抗,那么应该选择一抗的同型对照比如CD86的纯化抗体,亚型是Mouse IgG1,κ,二抗是PE标记的抗小鼠IgG1,那么它的同型对照是纯化的Mouse IgG1,κ。染色方式如下:样本管,纯化的CD86+PE标记的抗Mouse IgG1(二抗)+样本;同型对照管,纯化的同型对照+PE标记的抗Mouse IgG1(二抗)+样本。


如果没有找到适合的同型对照,在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下,优先选择的顺序是亚链不同--亚型不同--相同类别比如,某抗体的来源是Mouse IgG2а,κ。如果在同型对照表里找不到相同的同型对照,那么优先选择相同荧光标记Mouse IgG2а为同型对照;如果也没有找到Mouse IgG2а,那么优先选择相同荧光标记的Mouse IgG2b作为同型对照;如果后还是没有找到Mouse IgG2b,那么选择相同荧光标记的Mouse IgG2作为同型对照。


为什么有时候同型对照的表达会比抗体的表达高?

首先需要检查同型对照是否加错类型、剂量等。其次,因为有些标志在细胞的表面或者胞内表达不高,而跟其类似的抗原非常多,那么加入同型对照时,同型对照非特异性的结合会超过抗体的特异性,所以会造成这种现象。这个时候推荐使用其他阴性对照,如空白对照等。


关键词:流式细胞流式细胞
版权与免责声明:

凡本网注明“来源:智慧城市网”的所有作品,均为浙江兴旺宝明通网络有限公司-智慧城市网合法拥有版权或有权使用的作品,未经本网授权不得转载、摘编或利用其它方式使用上述作品。已经本网授权使用作品的,应在授权范围内使用,并注明“来源:智慧城市网”。违反上述声明者,本网将追究其相关法律责任。

本网转载并注明自其它来源(非智慧城市网)的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或和对其真实性负责,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品第一来源,并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题,请在作品发表之日起一周内与本网联系,否则视为放弃相关权利。

推荐企业
  • 深圳市顺安居智能科技有限公司

    深圳市顺安居智能科技有限公司专业从事防盗报警产品的开发、生产与销售,公司拥有自主知识产权,可根据客户要求量身订做,提供二次开发!公司近几年来,研制开发了一批科技含量高、性能优良、适应市场需求的智能防盗产品,并不断创新、推动技术的快速升级,产品的更新换代...
  • 广州鸿庆音响科技有限公司

    广州鸿庆音响科技有限公司成立2002年,是一家专业从事智能公共/消防广播系统、多功能会议厅、讨论型会议室、校园广播及多媒体教学系统等工程设计、施工及系统集成的专业性公司。TOA@PC(图奥特)、CTRLPA(肯卓)、GEBOSS(歌博思)、BOSCH(...
  • 北京三信通导技术有限公司

    北京三信通导技术有限公司至2010年成立以来,一直致力于GNSS产品、电子罗盘、惯性导航产品的研发、生产与销售,多年来服务对象涉及军民领域诸多用户,以研发能力强,供货及时,售后服务到位,获得用户*好评。北京三信通导技术有限公司以信念、信心、信誉为公司经...
  • 东台市港辉船舶设备有限公司

    东台市港辉船舶设备有限公司位于黄海之滨-江苏省东台市新街镇,水陆交通十分便捷。我公司是专业化销售绝热型浸水保温服,船用绝热型浸水保温服,消防抢险救生充气垫,船用燃油蝶式分离机等船用消防、救生产品的企业,工厂生产装备齐全,检测手段完备,技术力量雄厚,生产...
  • 东台市威尔安全装备有限公司

    东台市威尔安全装备有限公司中国专注于个人防护及工厂安全产品的主要制造商之一公司制造基地在中国江苏省东台市新街镇,目前公司已完成3000平方米新厂房的建设,生产和检测的现代化设备已安装完成,*的试验研发设备和具有前瞻知识的科技队伍为企业的发展与创新奠定了...