人α干扰素（IFN-α）ELISA试剂盒检测原理

人α干扰素（IFN-α）ELISA试剂盒检测原理

检测原理
试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人α干扰素（IFN-α）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并撤底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的人α干扰素（IFN-α）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

使用步骤（仅供参考）

1.  从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.  待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；

4.  随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

注意事项：

1.  试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡60分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶玩全溶解后再使用。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。

2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.  预处理后的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。

4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.  液体组分使用前充分摇匀。

6.本产品仅供科研实验用，不做其它用途！