艾美捷SynaptoGreen C4图例分析&文献参考

神经末端探针是一系列已开发的荧光阳离子苯乙烯染料以跟踪神经肌肉接头或突触处的突触活动。这些染料通常在一端有一个亲脂性的尾部（两个碳链）在另一端具有亲水性、带阳离子电荷的头基团。这些神经末梢探针最初被称为FM®染料，可从Biotium获得SynaptoGreen的商标名称™ 和突触红™. 突触绿色探针是具有单双键的染料（n=1），而SynaptoRed探针是具有三个双键（n＝3）。一种神经末梢染料被命名为突触绿或SynaptoRed，后跟一个表示亲脂性长度的碳数尾阳离子苯乙烯基染料被认为是通过对突触小泡进行染色而发挥作用的依赖活动的时尚。在存在细胞或组织制剂的情况下，染料其中染料实际上是非荧光的水相之间的分配，和细胞表面膜的外小叶，其中染料插入亲脂性末端进入膜并变得强烈荧光。在期间神经刺激后的内吞作用，染料被困在囊泡。因此，在洗掉细胞表面的染料后，荧光信号与新形成的囊泡的数量成比例。

另一方面，在胞吐、染料与神经递质一起从囊泡中释放，从而导致荧光信号的降低。因此，荧光的变化强度反映了胞吞/胞吐或突触活动的量。这个内吞过程中荧光增加的速率，“开启速率”和胞吐过程中的荧光减少，即“脱落率”，因染料而异。在里面一般来说，具有较长亲脂性尾部和较多双键的染料具有较高的对膜的亲和力，从而具有较高的开启速率和较低的关闭速率。一些苯乙烯基染料可以通过离子通道进入细胞。突触绿C18具有长碳链，不能通过离子通道，已被用作区分染料吸收机制的对照。突触绿色和突触红色是不可修复的。AM和HM染料是醛固定性神经末端染料。

当使用神经末梢染料时，研究人员经常遇到的一个问题是非特异性膜染色引起的背景荧光。尽管大多数背景荧光可以通过反复洗涤来去除，问题是对于具有较长尾部或更多双键的染料仍然很重要，特别是当染料用于组织制剂时。Biotium提供各种背景用于神经末梢染料的还原剂。ADVASEP-7是一种磺化β-环糊精，有助于在洗涤过程中去除染料。SCAS淬火

无需重复wsh步骤的膜结合染料的荧光. 磺基罗丹明101是一种能猝灭背景的红色荧光染料通过FRET从绿色神经末端染料发出荧光（5）。Biotium还提供神经终端染色套件，包括染料和背景还原剂。

艾美捷SynaptoGreen C4#70020图例分析：

图1：突触绿C4的吸收和发射光谱在脂质体中。其他突触绿色染料的光谱相似

图2：突触红C2在脂质体。其他突触红染料的光谱相似

SynaptoGreen C4化验方案：

以下是培养的神经末梢染色方案的一个例子盖玻片上的神经元。神经末端染料也可用于标记内吞作用非神经元细胞类型中的囊泡。染色可以在4℃下进行C表示选择性质膜的标记；室温或37度C、 细胞内吞作用染色通常在10分钟内发生。可以使用除Tyrode溶液以外的缓冲液习惯于添加钠通道阻断剂河-豚-毒素（TTX）是可选的，其目的是阻断动作电位，防止突触小泡在染色。可能需要确定特定应用的适合协议由用户进行；参见参考文献，了解脑切片染色方案的示例，以及其他细胞类型。

1.在50mM蒂罗尔中将神经末梢染料稀释至最终浓度为4uM解决方案将盖玻片与细胞一起放入此溶液中1分钟室温。使用足够的溶液将细胞完-全浸没。

2.将盖玻片转移到Tyrode+0.5μM河-豚-毒素（TTX，目录号。00061）溶液在室温下搅拌1分钟。

3.在室温下，用Tyrode+TTX清洗盖玻片数次。

注：为了减少背景，可以使用1mM ADVASEP-7（目录号70029）添加到洗涤溶液中。或者，SCAS（目录号70037）可以是用于在不重复洗涤的情况下骤冷背景。培养盖玻片在室温下在Tyrode+TTX+0.5mM SCAS中保持4分钟。

4.将盖玻片安装在Tyrode+TTX中并进行成像。注：对于SynaptoGreen染料，50μM磺基罗丹明101（目录no.80101），以猝灭细胞外荧光。

注意：SynaptoGreen和SynaptoRed染料不可固定。AM和HM染料（见相关产品）是可固定醛的神经末梢染料。

参考文献：

1. Vida, TA and Emr, SD. J. Cell Biol 128, 779(1995).

2. Meyers, JR, et al. J Neurosci., 23, 4054(2003).

3. Kay, AR, et al. Neuron 24, 809 (1999).

4. Höltje, M, et al. J. Biol. Chem. 283(14):9289(2008)

5. Pyle, JL, et al. Neuron 24, 803 (1999).