肥大细胞（甲苯胺蓝）染色液的操作步骤

肥大细胞(Mast cell)是疏松结缔组织内常见的细胞，常成群的沿着小血管和淋巴管分布，也常见于支气管和胰腺的小叶间导管周围，一般细胞较大，直径约为20-30μm，呈圆形或椭圆形，胞核较小、胞质内充满粗大且具有异染性嗜酸性颗粒。

甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。肥大细胞颗粒呈紫红色，其他呈蓝色。

操作步骤

取新鲜组织立即固定于10%中性福尔马林固定液中，常规脱水包埋。

切片厚度4-5μm，常规脱蜡至水。

系列乙醇各1min，自来水洗2min。

入Toluidine Blue O Stain，浸染15～30min。

自来水稍洗。

TBO分化液分化，直至细胞核和颗粒清晰，可在显微镜下控制。

自来水稍洗，滤纸吸干或吹风机吹干水分。

95%乙醇1min，无水乙醇2次，每次2min。

二甲苯透明，中性树胶封固。

染色结果：

肥大细胞颗粒 紫蓝色

背景 淡蓝色

注意事项：

针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色，浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应相应延长。

应注意组织要新鲜，取出后立即固定。

甲苯胺蓝染色后不宜采用低浓度乙醇脱水，否则容易导致褪色。

分色后应快速入95%乙醇、无水乙醇、二甲苯的时间不宜过久，否则容易导致褪色。