ELISA实验检测方法的优缺点

ELISA实验所有方法的缺点很明显：
1、重复性不好；
2、收自身抗体、嗜异性抗体等干扰，易出现假阳性；
3、不论仪器和手工操作，干扰因素较多。影响最大的是温度和时间。

1、直接法（direct ELISA） 

将抗原直接固定在固相载体上，参加酶符号的一级抗体，即可测定抗原总量，此一级抗体的特异性非常重要。

优势：操作手续简略，因无须运用二抗可防止交互反响。

缺陷：实验中的一抗都得用酶符号，但不是每种抗体都适合做符号，费用相对进步。

2.间接法（indirect ELISA） 

此测定办法与直接法相似，不一样在于一级抗体没有酶符号，改用酶符号的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。

优势：二抗能够加强信号，并且有多种挑选能做不一样的测定剖析。不加酶符号的一级抗体则能保存它最多的免疫反响性。

缺陷：交互反响发作的机率较高。

3.双抗体夹心法（sandwich ELISA） 

被检测的抗原包被在两个抗体之间，其间一个抗体将抗原固定于固相载体上，即捕捉抗体。另一个则是检测抗体，此抗体可用酶符号后直接测定抗原的量；或不符号，再透过酶符号的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体有必要当心选择，才可防止交互反响或竞争一样的抗原联系部位。

优势：高活络、高专一性，抗原无须事前纯化。

缺陷：抗原必定得具有两个以上的抗体联系部位。

4.竞争法（competitive ELISA） 

样本里的抗原（自在抗原）和纯化并固定在固相载体上的抗原（固定抗原）一同竞争一样的抗体，当样品里的自在抗原越多，就能够联系越多的抗体，而固定抗原就只能联系到较少的抗体，反之亦然。经清洁过程，洗去自在抗原和抗体的复合物，只留下固定抗原和抗体的复合物，拿来与只要固定抗原的对照组成果相比拟，依据呈色区别就可计算出样品里的抗原含量。

优势：可适用比拟不纯的样本，并且数据再现性很高。

缺陷：全体的敏感性和专一性都较差。